【摘要】：現(xiàn)如今各種急慢性炎癥所引發(fā)的疾病嚴重影響著人類健康,同時造成巨大社會經濟浪費,因此開發(fā)更多安全改善藥物成為當務之急。天然植物抗菌液(PAMs)1號和2號(K1和K2)是由云南普洱丹州制藥有限公司生產的民族醫(yī)藥產品,前期研究發(fā)現(xiàn),其具有抑菌消毒、鎮(zhèn)痛、抗糖尿病足潰瘍以及對白血病K562細胞的促凋亡作用等功效,但對其功效成分、抗炎機制、皮膚炎癥改善效果尚不清楚,故進行本次研究。首先采用HPLC法,以藥典條件為參考,經檢測發(fā)現(xiàn)K1和K2中含有尿囊素分別為552.61μg/mL和502.33μg/mL,羥基紅花黃色素A分別為204.04μg/mL和62.51μg/mL,但只有K2中檢測到微量的薯蕷皂苷元為49 μg/mL和草烏甲素為14μg/mL。其次選用K2為抗炎機制研究的樣品,一方面測定K2對各類型細胞活力影響進行探究,發(fā)現(xiàn)其對肝癌HpG2、肺癌A549、RAW264.7細胞具有劑量依賴性的抑制作用(p0.05)。另一方面利用LPS誘導RAW264.7巨噬細胞建立細胞炎癥模型,經K2預處理后,細胞上清中促炎癥介質NO明顯被抑制(p0.0001),胞內ROS被清除,均表現(xiàn)出具有明顯的劑量依賴性抑制作用(p0.001),與炎癥密切相關的蛋白COX-2、iNOS蛋白均出現(xiàn)下調(p0.05),并且利用熒光雙染法觀察到其抑制NF-kappaB炎癥通路中的p65蛋白細胞核轉移。綜上,K2通過清除ROS活性,下調NO產物,COX-2、iNOS蛋白來減輕炎癥,推測K2對MAPK和NF-kB通路具有抑制作用,可能具有多通路抗炎活性。此外利用2,4-二硝基氟苯(DNFB)誘導BALB/c小鼠建立變應性接觸性皮炎(ACD)模型,給予不同處理后,陽性組,K1及K2組耳部腫脹和血管充血得到改善,并且其外周血中的TNF-α,IL-1β水平不同程度下降(p0.05),HE染色提示其表皮增厚和淋巴細胞浸潤明顯減少。同時免疫組化分析發(fā)現(xiàn),與模型組相比,K1及K2組中TNF-α,Ki67蛋白表達均下調(p0.001),并利用Western blotting定量Ki67蛋白表達分析進一步得到確認。說明增殖與腫脹水平呈正相關,K1及K2組能不同程度減輕炎癥,且K1效果好于K2。從肝脾指數(shù)可知,K1及K2組與空白組無顯著差異(p0.05),且低于模型組。推測K1和K2對ACD療效可能是通過阻斷細胞炎癥因子(TNF-α,IL-1β)以及抑制細胞增殖來達到減輕病灶部位腫脹和炎癥的功效,并且具有保肝護脾的優(yōu)點。綜上,天然植物抗菌液中含有豐富的尿囊素和羥基紅花黃色素A,且K2中含有少量的草烏甲素和薯蕷皂苷元,為建立規(guī)范的產品質量控制標準提供參考;在以K2為代表的抗炎作用機制初探中,發(fā)現(xiàn)其可通過調控炎癥介質(ROS,NO)和相關蛋白(iNOS,COX-2,p65)來抑制MAPK和NF-kB等通路發(fā)揮抗炎活性;PAMs通過下調ACD病灶部位相關蛋白以及抑制炎癥因子而具有改善耳部紅腫和淋巴細胞浸潤等抗炎功效。因此,以上研究成果為天然植物抗菌液深入的臨床研究奠定基礎。
